Proliferation of human adipose tissue-derived stem cells stimulated by oil rich in thymol of Lippia origanoides

Abstract Purpose: To evaluate the effects of this thymol-rich oil in the proliferation of human adipose tissue-derived stem cells. Methods: Stem cells were isolated from human adipose tissue by liposuction. After the first passage, cells were cultivated in triplicate for three days in control medium and medium supplemented with three oil samples (1.0 μg/mL, 5.0 μg/mL, and 25.0 μg/mL). Cells were analyzed by the MTT assay at passage 1 (P1), and cell proliferation of control and 1 μg/mL groups was determined with a hemocytometer at P2 and P3. Results: Viability of the essential oil-treated cells was significantly higher than the control group at P1 (p = 0.0008). The treatment with the oil, at a concentration of 1 µg/mL, led to increases of 24.8% at P1 and 43.0% at P3 in the rate of cell proliferation compared with control cells. Conclusion: Supplementing culture medium with essential oil of Lippia origanoides increased cell proliferation, especially at later passages.

Stem cells from adipose tissue improve the time of wound healing in rats

ABSTRACT PURPOSE: To evaluate the Adipose Stem Cells (ACS) therapy efficacy on the time and quality of wound healing process in rats. METHODS: Nine male Wistar rats were randomly distributed into three groups I) 7 days of healing; II) 14 days of healing; III) 21 days of healing. Four incisions were made on the dorsal surface of each rat and then treated with intralesional ACS, meloxicam, and no treatment and ACS+meloxicam. Macroscopic evaluation was measured by percentage of healing and histopathological by hematoxylin-eosin was performed. RESULTS: All groups have the wound reduced during the three weeks (p<0.001) and after 14 days of healing had greater reduction than others. Wounds treated with ASC had accelerated healing in relation to no treatment and only meloxicam (p<0.001), excepting the ASC+Meloxicam that was similar (p=0.13). There was no difference in histopathological analysis between lesions. CONCLUSION: Adipose stem cell have benefits in reducing time of healing of experimental model of wound in rats, observed 7 days of after application.

Profile of plasmatic progesterone on pregnancy, and the postpartum estrus of Dasyprocta prymnolopha (Rodentia: Dasyproctidae) / Perfil de la progesterona plasmática durante durante la preñez y celo posparto del Dasyprocta prymnolopha (Rodentia: Dasyproctidae)

Abstract:The agouti (Dasyprocta sp.) is a hystricomorph rodent found in some regions of the Americas. It is an important cynegetic species, which indicates that the overhunting is a threat to their conservation. Very little is known about this wildlife in relation to what already has been studied in domestic animals. Thus, the knowledge on reproduction of wildlife becomes necessary and essential for the management and conservation of these natural resources. Specifically, studies regarding hormonal monitoring are important as a basic tool for research in modern reproductive biotechnology, and currently, there is no information on the progesterone changes during pregnancy of Dasyprocta sp., compared to other hystricomorphs. The aim of this study was to describe the profile of plasmatic progesterone during pregnancy, and report the restart of ovarian cycle in agouti after parturition. For this purpose, 18 black-rumped agoutis (Dasyprocta prymnolopha) born in captivity were used, and one or more consecutive pregnancies were observed. Copulation was confirmed by the presence of spermatozoa observed in the colpocytological examination. Blood samples were collected two times per week, and concentrations of progesterone, assessed in ten agoutis, were determined by radioimmunoassay. The onset of ovarian activity in six females was observed daily by colpocytological examination, starting on the seventh day postpartum. The gestational period observed in this study was 104.04 days (SD = 1.31) (101-106 days) (Number of cases, N = 26), and the interval between births was 126.03 days (SD = 18.40) (109-184 days). The plasmatic profile of progesterone during pregnancy showed a progressive increase from the 1st to the 5th week. The higher progesterone levels over this period (6.88 ng / mL, SD = 3.01) were detected in the 5th week. This value was similar (One-Way ANOVA, p > 0.05) to that observed in the 4th and 6th weeks, but was statistically different (One-Way ANOVA, p < 0.05) when compared to the other weeks. After the 6th week there was a progressive decrease in plasmatic progesterone levels. The animals showed a postpartum estrus of 12.04 days (SD= 4.29) (7-24 days) (N= 23). It was observed that 80.95 % (N= 19) of copulations during this period were fertile. This work contributed to understanding the dynamic changes in the progesterone levels during the pregnancy in agouti. Nevertheless, more studies are needed for a better appreciation of other endocrine and biological changes, in the mother and feto-placental unit of the agouti. Rev. Biol. Trop. 64 (4): 1519-1526. Epub 2016 December 01.

Resumen:El agouti (Dasyprocta sp.) es un roedor histricomorfo encontrado en algunas regiones de América. Es una especie cinegética importante, lo que indica que la caza excesiva es una amenaza para su conservación. Muy poco es lo que se conoce acerca de la biología de los animales silvestres, en relación al conocimiento acumulado sobre los domésticos. Por lo tanto, el estudio sobre la reproducción de los animales silvestres se hace necesario e imprescindible para el manejo y conservación de la especie como recurso natural. En concreto, los estudios relativos a la monitorización hormonal son una herramienta básica para la investigación en biotecnología reproductiva moderna. No hay información sobre los cambios de progesterona durante la preñez de Dasyprocta sp. en comparación con otros histricomorfos. El objetivo de este estudio fue describir el perfil de la progesterona plasmática durante la preñez, y reportar el reinicio del ciclo ovárico después del parto. Para ello, se utilizaron 18 agoutis de rabo negro (Dasyprocta prymnolopha) nacidos en cautiverio. Fueron estudiadas una o más preñeces consecutivas. La copulación fue confirmada por la presencia de espermatozoides observados en examen colpocitológico. Las muestras de sangre se recogieron dos veces por semana, y las concentraciones de progesterona se determinaron en 10 individuos mediante radioinmunoensayo. Se observó el inicio de la actividad ovárica diaria por examen colpocitológico, comenzando en el día séptimo posparto. El período gestacional observado en este estudio fue de 104.04 días (SD= 1.31, rango entre 101-106 días, N= 26), y el intervalo entre los nacimientos fue 126.03 días (SD= 18.40, rango entre 109-184 días). El perfil plasmático de la progesterona durante el embarazo mostró un aumento progresivo de la 1ª a la 5ª semana. Los mayores niveles de progesterona durante este período (6.88 ng / mL, SD= 3.01) se detectaron en la quinta semana. Este valor fue similar (ANOVA de um factor, p > 0.05) al observado en las semanas cuatro y seis, pero fue estadísticamente diferente (ANOVA de um factor, p<0.05) en comparación con las otras semanas. Después de la sexta semana hubo una disminución progresiva en los niveles plasmáticos de progesterona. Los animales mostraron un estro posparto de 12.04 días (SD= 4.29, rango entre 7-24 días, N= 23). Se observó que el 80.95 % (N= 19) de cópulas durante este período fueron fértiles. Este trabajo contribuyó a la comprensión de los cambios dinámicos en los niveles de progesterona durante la preñez del agouti. Sin embargo, se necesitan más estudios para una mejor comprensión de otros cambios biológicos y endocrinos, y en la unidad materna y feto-placentaria del agouti.

Epididymal morphophysiology of adult collared peccaries (Pecari tajacu) / Morfofisiologia epididimária de catitus (Pecari tajacu) adultos

A functional understanding of the epididymis makes it possible to increase a species' fertility, since it facilitates the preservation of gametes for use in assisted reproduction techniques. This study analyzed the histological features of the different regions of the epididymis of the Pecari tajacu and the associated pathologies found in the spermatozoa present in this organ. After an orchiectomy surgery to remove the testicles and epididymis obtained from eight adult animals bred in captivity, fixation and histological processing of samples were carried out. The presence of pseudostratified columnar epithelium with stereocilia was observed in all regions of the epididymis (caput, corpus and caudal). Similarities were noted between the average height of the corpus and caudal epithelium, which differed from that found at the caput (1- proximal: region associated with the efferent ducts; 2- distal: region associated with corpus epididymis). It was also observed that the proximal caput presents a smaller average of the tubules diameter compared to other portions of the epididymis. Regarding pathologies of the spermatozoa, thirteen different types of morphological modifications were observed. Underdeveloped spermatozoa and detached heads were most frequently encountered along the epididymis of the collared peccaries. This study is a pioneer in the area and its data will serve as a basis for comparative research on the reproductive biology of artiodactyls, thus contributing to their conservation and reproduction.(AU)

O entendimento funcional do epidídimo possibilita o aumento da fertilidade de uma espécie, pois torna possível a preservação de gametas para o uso em técnicas de reprodução assistida. Este trabalho estudou os aspectos histológicos das diferentes regiões do epidídimo de Pecari tajacu, bem como as patologias associadas encontradas nos espermatozoides presentes nesse órgão. Após procedimento cirúrgico de orquiectomia, para remoção dos testículos e epidídimos, obtidos de oito animais adultos nascidos em cativeiro, realizou-se a fixação e o processamento histológico das amostras. Constatou-se em todas as regiões do epidídimo (cabeça, corpo e cauda) a presença de epitélio pseudoestratificado colunar com estereocílios. Foram observadas semelhanças entre a altura média do epitélio do corpo e da cauda, a qual era diferente da encontrada na cabeça (1- proximal: região associada aos ductos eferentes; 2- distal: região associada ao corpo do epidídimo). Foi verificado que a cabeça proximal apresenta a média de diâmetro dos túbulos menor em relação às demais porções do epidídimo. Em relação às patologias dos espermatozoides, constataram-se treze tipos diferentes de alterações morfológicas. Os espermatozoides subdesenvolvidos e cabeças soltas foram as mais frequentes ao longo do epidídimo de catitus. Os dados deste trabalho são pioneiros, e servirão como base para pesquisas comparativas sobre a biologia reprodutiva dos artiodátilos, contribuindo para a sua conservação e produção.(AU)

Ovogênese e foliculogênese em mamíferos / Oogenesis and folliculogenesis in mammals

Os ovários são órgãos sexuais femininos que tem como principais funções a gametogênese e a esteroidogenese. A gametogênese caracteriza-se pela produção de células reprodutivas femininas ou óvulos e a esteroidogenese pela produção de hormônios esteróides. Em especial nos ruminantes, a formação dos gametas femininos e dos folículos ovarianos é iniciada no período pré-natal. Esta revisão destaca os principais processos morfofisiológicos envolvidos na ovogênese e na foliculogênese. A ovogênese pode ser definida como o conjunto de processos que compreende o desenvolvimento e diferenciação das células germinativas primordiais até a formação do óvulo e sua fecundação. Já a foliculogênese inclui a unidade morfofuncional do ovário que desempenha a função de produção de hormônios esteróides e a de manutenção da viabilidade do óvulo até a ovulação. Com o crescente avanço das biotécnicas de reprodução assistida, a compreensão das funções da ovogênese e foliculogênese é essencial para eficiência reprodutiva dos animais e para obtenção de descendentes viáveis a partir de ovócitos cultivados in vitro.

The ovaries are the female sexual organs whose main functions are the gametogenesis and steroidogenesis. Gametogenesis is characterized by the production of female reproductive cells or ova, and steroidogenesis by the production of steroid hormones. Especially in ruminants, the formation of female gametes and ovarian follicles is initiated in the prenatal period. This review highlights the main morphophysiological processes involved in oogenesis and folliculogenesis. Oogenesis can be defined as the set of processes covering the development and differentiation of primordial germ cells until the formation of the egg and its fertilization. On the other hand, folliculogenesis includes morphofunctional unit of the ovary that serves as the production of steroid hormones and maintenance of the viability of the egg until ovulation. With an increasing breakthrough of biotechnical assisted reproductive functions, understanding of oogenesis and folliculogenesis is essential for reproductive efficiency of animals and for obtaining viable offspring from oocytes cultured in vitro.

Plasma concentration of progesterone and 17ß-estradiol of black-rumped agouti (Dasyprocta prymnolopha) during the estrous cycle

Plasma concentration of progesterone and 17β-estradiol of black-rumped agouti (Dasyprocta prymnolopha) during the estrous cycle. The agouti is a game animal that have been raised in captivity for conservation and sustainability purposes. However, the management of wild animals in an intensive breeding system requires an assertive knowledge of its reproductive parameters, one of the most important features for production improvement. Besides, little information is available regarding changes in reproductive hormone profiles in agouti. The objective of this study was to evaluate the hormonal profile of progesterone and 17β-estradiol during the estrous cycle of the agouti (Dasyprocta prymnolopha). The hormones were analyzed by radioimmunoassay. Blood samples were collected without sedation twice a week. The concentrations of progesterone were as follows: proestrus 0.78+0.39ng/ml, estrus 2.83+2.34ng/ml, metestrus 1.49+1.24ng/ml, diestrus 3.71+1.48ng/ml. In the estrous phase, an increase in the progesterone level was observed during a period of 24h. The average 17 β-estradiol levels were as follows: proestrus 2 030.98+961.00pg/ml, estrus 1 910.56+650.54pg/ml, metestrus 1 724.83+767.28pg/ml, diestrus 1 939.94+725.29pg/ml. The current results suggest that the progesterone plasma concentration during the estrous cycle in the agouti has a similar increasing, stabilizing and decreasing pattern, as in domestic mammals. Agoutis have two phases of follicular development, as two periods of 17β-estradiol peaks were observed, the first one in the metestrus and the second during the proestrus. Spontaneous ovulation seems to occur after the progesterone peak, possibly indicating that this hormone is associated with the ovulatory process. A more detailed investigation is needed for better understanding of how progesterone influences ovulation. Studies on the involvement of progesterone in follicular rupture can be carried out, using steroid biosynthesis inhibitors and observing the effect of this hormone on ovarian activity of proteolytic enzymes in the follicular wall. Rev. Biol. Trop. 59 (1): 29-35. Epub 2011 March 01.

El conocimiento de los procesos reproductivos de especies de importancia económica local son indispensables para apoyar su producción en cautiverio y garantizar su manejo sostenible. El objetivo del presente trabajo fue evaluar los niveles hormonales de progesterona y 17β-estradiol durante el ciclo estral en agutí (Dasyprocta prymnolopha). La recolección de sangre se realizó dos veces por semana, sin sedación. Las hormonas fueron analizadas por radioinmunoanálisis. Los niveles de progesterona fueron los siguientes: proestro 0.78+0.39ng/ml, estro 2.83+2.34ng/ml, metaestro 1.49+1.24ng/ml y diestro 3.71+1.48ng/ml. En el estro se observó un aumento de los niveles de progesterona durante un periodo de 24h. Los niveles de 17 β-estradiol fueron los siguientes: proestro 2 030.98+961.00pg/ml, estro 1 910.56+650.54pg/ml, metaesto 1 724.83+767.28pg/ml y diestro 1 939.94+725.29pg/ ml. Los resultados encontrados sugieren que los niveles plasmáticos de progesterona durante el ciclo estral en agutí siguen un patrón de aumento, estabilización y diminución, tal como en los mamíferos domésticos. Agutí tienen dos etapas de desarrollo folicular, puesto que se observaron dos altos valores de 17β-estradiol, el primero en el metaestro y el segundo durante el proestro. La ovulación espontánea ocurre posiblemente después del aumento de la progesterona, indicando que esta hormona posiblemente está asociada con el proceso ovulatorio. Es necesario desarrollar un estudio más detallado para mejorar la comprensión del papel de la progesterona en la ovulación. Algunos estudios de la participación de la progesterona en la ruptura folicular se pueden realizar utilizando inhibidores de la biosíntesis de esteroides y observar el efecto de esta hormona sobre la actividad de las enzimas proteolíticas en la pared folicular.

Biometria testicular, eletroejaculação e características seminais de caititus, Tayassu tajacu Linnaeus, 1758 (Mammalia, Artiodactyla, Tayassuidae) mantidos em cativeiro na Amazônia Oriental / Testicular biometry, electroejaculation and seminal features of captive collared peccaries (Tayassu tajacu Linnaeus, 1758, Artiodactyla, Tayassuidae) raised in the Eastern Amazon

Estudos relacionados à obtenção e avaliação de sêmen de Tayassu tajacu são escassos, sendo necessárias pesquisas a respeito. Os objetivos do estudo foram avaliar a biometria testicular de caititus adultos cativos, testar a eficiência da eletroejaculação para obtenção de sêmen e avaliar suas características seminais ao longo do ano. Procedeu-se à eletroejaculação em oito animais adultos e as amostras de sêmen colhidas foram avaliadas quanto às características físicas e morfológicas. Os animais tinham testículo esquerdo com 3,8 ± 0,4 cm X 2,6 ± 0,3 cm e 2,3 ± 0,2 de consistência, e testículo direito com 3,8 ± 0,5 cm X 2,7 ± 0,3 cm e 2,3 ± 0,2 de consistência. A taxa de sucesso nas colheitas foi de 75,21%. O sêmen possuiu: volume 0,81 ± 0,86 mL, concentração 137,44 ± 153 x 106 sptz mL-1, pH 7,92 ± 0,73, motilidade 52,66 ± 28,79%, vigor 2,2 ± 0,8, integridade de membrana plasmática 55,84 ± 28,55%, defeitos maiores 22,87 ± 12,93%, defeitos menores 9,11 ± 5,88% e defeitos totais 31,52 ± 13,81%. Os animais apresentaram simetria testicular, a eletroejaculação se mostrou eficiente para a obtenção de ejaculados em caititus e as flutuações observadas na produção seminal não foram suficientes para caracterizá-los como animais de reprodução sazonal.

Research development in semen collection and sperm evaluation of Tayassu tajacu are necessary. The aims of this research were to evaluate testicular biometry of captive collared peccaries, test electroejaculation for semen collection and evaluate seminal characteristics during the year. Eight animals were submitted to electroejaculation and semen samples were evaluated according their physical and morphological characteristics. Left testicles measured 3.8 ± 0.4 cm X 2.6 ± 0.3 cm and presented 2.3 ± 0.2 of consistence, while right testicles were 3.8 ± 0.5 cm X 2.7 ± 0.3 cm and presented 2.3 ± 0.2 of consistence. Success rate on semen collections achieved 75.21%. Semen presented 0.81 ± 0.86 mL (volume), 137.44 ± 153 x 106 sptz mL-1 (sperm concentration), 7.92 ± 0.73 (pH), 52.66 ± 28.79% (sperm motility), 2.2 ± 0.8 (vigour), 55.84 ± 28.55% (plasmatic membrane integrity), 22.87 ± 12.93% (primary defects), 9.11 ± 5.88% (secondary defects) and 31.52 ± 13.81% (overall defects). Seminal characteristics showed no expressive variation along the year. Testicular symmetry was observed, electroejaculation was an efficient method to semen collection and slight mensal oscillations of seminal quality were not enough to characterize collared peccaries as seasonal reproductive animals.

Características reprodutivas da paca fêmea (Agouti paca) criada em cativeiro / Reprodutive characteristics of the female paca (Agouti paca) raised in captivity

O objetivo do trabalho foi estudar a biologia reprodutiva da Agouti paca criada em cativeiro. Os resultados demonstraram que, a duração média do ciclo estral foi de 32,5 + 3,7 dias e o período gestacional de 148,6 + 4,8 dias. O intervalo entre partos foi de 224,5 + 52,2 dias e o primeiro cio pós-parto foi de 25,6 + 8,8 dias. A maioria (55,6 por cento) das fêmeas apresentou dois partos por ano, com o nascimento de um filhote por parto, sendo 44,7 por cento fêmeas e 55,3 por cento machos. Ao nascer o peso médio das fêmeas foi de 605,9 + 87,5 g e dos machos 736,7 + 108,4 g (P < 0,05). A puberdade das fêmeas ocorreu entre o 8º e 12º mês, porém neste aspecto são necessárias investigações mais detalhadas.

The objective of this paper was to study the reproductive biology of the Agouti paca raised in captivity. It was observed that the estrous cycle average was 32.5 + 3.7 days, gestation length 148.6 + 4.8 days, parturition interval 224.5 + 52.2 days, and the first post-partum 25.6 + 8.8 days. It was also observed that 55.5 percent of the females presented two parturitions per year with one young per parturition, of which 44.7 percent were females and 55.3 percent were males. The birth weight was 605.9 + 87.8 g for females and 736.7 + 108.4 g for males (P<0.05). Puberty in females occurred between 8 to 12 months; for this, however, more detailed investigations are necessary.

Histological study of capuchin monkey (Cebus apella) ovarian follicles

O objetivo do presente trabalho foi obter dados quantitativos e qualitativos da população folicular ovariana de fêmeas de Cebus apella. Foram obtidos 7 ovários de 4 fêmeas adultas de C. apella através de ovariectomia. Os ovários foram submetidos à preparação para histologia ótica de rotina. O número de folículos pré-antrais e antrais por ovário foi estimado utilizando o Método Fracionador. Os folículos pré-antrais foram classificados em primordial, transição, primário e secundário. Foram considerados folículos antrais todos aqueles que apresentavam uma cavidade antral. Todos os folículos contados foram classificados em normais ou degenerados. Com o intuito de acompanhar o desenvolvimento folicular, os diâmetros médios folicular, oocitário e do núcleo do oócito foram determinados. Todos os resultados foram apresentados em Média ± Erro Padrão. A população média de folículos pré-antrais foi de 56.938 ± 21.888 e 49.133 ± 26.896 para os ovários direito e esquerdo, respectivamente. A percentagem de folículos pré-antrais estimados normais foi de 80,00 ± 4,95 %. O diâmetro médio folicular variou de 22,0 ± 0,5 µm a 61,2 ± 4,0 µm. No tocante aos folículos antrais, a população média de folículos normais e degenerados por ovário foi de 60,0 ± 19,0 e 3 ± 1,8 folículos, respectivamente. O diâmetro médio folicular foi de 514,4 ± 56,6 µm. Para concluir, as informações obtidas neste trabalho poderão servir como parâmetro para posteriores estudos in vivo ou in vitro da foliculogênese de primatas não-humanos neotropicais da espécie C. apella.

Preservation of goat preantral follicles in saline or coconut water solution

The present study investigated the efficiency of saline solution and coconut water solution in the preservation of goat preantral follicles enclosed in ovarian tissue, at different temperatures and for different incubation periods. At the slaughterhouse, the ovarian pair was divided into 19 fragments; one ovarian fragment was immediately fixed for histology (control-time zero). The other 18 ovarian fragments were preserved in both solutions at 4ºC, 20ºC or 39ºC for 4 h, 12 h or 24 h. The histological analysis showed that the storage of ovarian fragments in both solutions at 4ºC for up to 24 h kept the percentage of normal preantral follicles similar to the control values. In contrast, preservation at 20°C or 39ºC, in either solution, reduced significantly the percentage of normal preantral follicles compared to the control values, except in saline solution at 20ºC for 4 h or in coconut water solution at 20ºC for 4 h and 12 h. In conclusion, this study shows that both solutions can be used with the same efficiency to preserve goat preantral follicles at 4°C, irrespective of the incubation time. However, to preserve goat preantral follicles at higher temperatures, coconut water solution is recommended

Cinética da maturaçäo nuclear in vitro de oócitos bubalinos / Nulear maturation kinetcs in vitro of buffalo oocytes

Com o objetivo de avaliar a cinética da maturaçäo in vitro de oócitos bubalinos, foram cultivados 1.619 oócitos com cumulus oophorus compacto em quatro diferentes tratamentos: T1 - TCM 199 com 10 por cento de Soro Fetal Bovino (SFB) (meio base); T2 - Meio base e células da granulosa (CG); T3 - Meio base, CG, 10 UI de gonadotrofina coriônica equina (eCG) e 10 UI de gonadotrofina coriônica humana (hCG); T4 - Meio base, 10 UI de eCG, 10UI de hCG e 1 µg de 17b-estradiol / ml, em tempos de 14 a 17h, 20 a 22h, 23 a 25h, 26 a 28h, 29h e 32h de cultivo em estufa de CO2 a 5 por cento e temperatura de 38,5ºC. No tratamento 1, observou-se que 81,83 por cento, 69,61 por cento, 65,88 por cento, 60,28 por cento, 64,98 por cento e 67,67 por cento dos ovócitos reiniciaram a meiose. No tratamento 2, as taxas de reinicio da meiose foram de 76,06 por cento, 72,06 por cento, 69,78 por cento, 68,12 por cento,74,97 por cento e 89,96 por cento, no tratamento 3 estes percentuais foram de 83,59 por cento, 78,86 por cento, 77,49 por cento, 82,4 por cento, 72,92 por cento e 81,06 por cento e com o tratamento 4 os índices foram de 95,0 por cento, 91,82 por cento, 93, 17 por cento, 91,65 por cento, 92,09 por cento e 74,99 por cento nos tempos de 14 a 17h, 20 a 22h, 23 a 25h, 26 a 28h, 29h e 32h de cultivo, respectivamente, podendo-se concluir que o meio com maior suplementaçäo proporciona maior taxa de reinício da meiose em menor tempo, assim como o aumento no tempo de cultivo pode levar a maiores índices de degeneraçäo